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介紹透射電鏡的樣品準(zhǔn)備的2種方法

更新時間:2020-11-24      點(diǎn)擊次數(shù):1659
  
透射電鏡是一種綜合性大型分析儀器,在現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的研究開發(fā)工作中被廣泛地使用。由于透射電鏡能觀察的樣品必須很薄(60~70nm),所以透射電鏡的樣品準(zhǔn)備要求很嚴(yán)格,方法也很單一。一般有以下兩種方法:
一、負(fù)染色技術(shù)
負(fù)染色技術(shù)簡單快速,可以顯示生物大分子、細(xì)菌、分離的細(xì)胞器以及蛋白晶體等樣品的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、大小以及表面結(jié)構(gòu)的特征。尤其在病毒學(xué)中,負(fù)染色技術(shù)有著廣泛的應(yīng)用。
樣品要求:①透射電鏡樣品懸液的純度不要求很純,但是如果雜質(zhì)太多,如大量的細(xì)胞碎片,培養(yǎng)基殘?jiān)?,糖類以及各種鹽類結(jié)晶的存在都會干擾染色反應(yīng)和透射電鏡的觀察。尤其是不能有過多的糖類,因?yàn)樵陔娮邮霓Z擊下,糖類容易碳化而有礙觀察,因此樣品要適當(dāng)提純。②樣品懸液的濃度要適中,太稀在透射電鏡下很難找到樣品,太濃樣品堆積影響觀察。
操作流程:吸取樣品懸液滴到有膜的銅網(wǎng)上,靜置數(shù)分鐘,然后用濾紙吸去多余的液體,滴上負(fù)染色液,染色1~2min后濾紙吸去負(fù)染色液,待干后用于透射電鏡觀察。
二、超薄切片技術(shù)
超薄切片技術(shù)是為透射電鏡觀察提供薄樣品的專門技術(shù),是生物學(xué)中研究細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)Z常用的技術(shù)。廣泛應(yīng)用于生物體的各種細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)觀察。一般厚度在10~100nm的切片稱為超薄切片,制作這種切片的技術(shù)叫做超薄切片技術(shù)。超薄切片制作的過程包括取材、固定、脫水、滲透、包埋、聚合、切片和染色等幾個環(huán)節(jié),和一般光學(xué)顯微鏡的石蠟切片過程相似。但是,超薄切片切片過程更為細(xì)致與復(fù)雜,要求更嚴(yán)格,而且所用的試劑比較昂貴、配制復(fù)雜、強(qiáng)致癌。

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